REGgamma基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛋白酶体激活因子REGgamma(REGγ)基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的作用。方法:构建真核表达重组体PcDNA3.1-REGγ,通过脂质体转染将REGγ基因导入MCF-7,以G418(800mg/L)连续筛选获得稳定高表达REGγ基因的细胞株,以转染空载体和未转染细胞作为对照。分别利用MTT法及免疫细胞化学方法检测各组细胞PCNA的表达分析REGγ基因对细胞增殖的影响;以Caspase-3分光光度法及Annexin V-FITC的流式细胞仪(FCM)来检测细胞凋亡的变化;以透射电镜(TEM)观察细胞超微结构的改变。结果:获得稳定转染且高表达REGγ的细胞株。经Western Blot检测转染REGγ基因的细胞(实验组),其REGγ蛋白表达明显高于对照组细胞(P<0.05);未转染组、空载体组和实验组细胞的倍增时间分别为34.6、35.1、26.7h,提示实验组细胞倍增时间缩短;MTT法绘制生长曲线提示实验组细胞生长明显加速;免疫细胞化学检测PCNA结果显示,未转染组、空载体组和实验组细胞的染色灰度值分别为89.61±14.32、87.95±16.38、133.47±8.14,表明实验组细胞PCNA表达明显增强(P<0.01);Caspase-3分光光度法检测显示,实验组细胞的OD值普遍低于对照组(P<0.05);Annexin V-FITC的FCM检测显示,实验组细胞的凋亡率明显低于对照组(P<0.01);TEM观察实验组细胞表现为核仁肥大,线粒体、高尔基体丰富或扩张,未见凋亡小体形成。结论:REGγ基因具有促进乳腺癌MCF-7细胞增殖并抑制其凋亡的作用。