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分子生物学常用实验方法.[M].姜泊等主编;.人民军医出版社.1996,
钠-氢交换蛋白1反义表达载体对人肺腺癌细胞钠-氢交换蛋白1基因表达的影响及其意义
被引：4
作者：
吴国明
钱桂生
黄桂君
李淑萍
姚伟
陆俊羽
机构：
[1] 第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所,第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所,第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所,第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所,第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所,第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所重庆,重庆,重庆,重庆,重庆,重庆
来源：
关键词：
钠氢反向转运物;
RNA,反义;
肺肿瘤;
转染;
氢离子浓度;
D O I：
暂无
中图分类号：
R734.2 [肺肿瘤];
学科分类号：
100117 [系统生物医学];
摘要：
目的 探讨Na+ /H+ 交换蛋白 1(NHE 1)反义表达载体 (pNHE 1)对人肺癌细胞NHE 1基因的抑制作用及生物学效应。方法 实验细胞分为 3组 ,A5 4 9 pNHE 1组 (反义组 )、A5 4 9空载体组(空载体组 )、A5 4 9对照组 (A5 4 9组 )。采用阳离子脂质体使pNHE 1转染人肺腺癌A5 4 9细胞株。采用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)法测定 3组细胞的NHE 1mRNA表达水平 ;用荧光法测定 3组细胞内pH(pHi)值 ;了解转染细胞增殖生长状况 ;用细胞凋亡原位检测法检测 3组细胞凋亡率。结果 在转染细胞基因组DNA中扩增出外源真核表达载体的DNA片段 ,证明转染成功。半定量RT PCR法证实反义组细胞的NHE 1mRNA表达水平 (0 4 2± 0 0 6 )显著低于A5 4 9组 (0 71± 0 0 8,P <0 0 1)和空载体组 (0 6 9± 0 16 ,P <0 0 1)。A5 4 9组细胞在培养 12、2 4和 4 8h后pHi值分别为 7 15 0±0 0 0 4、7 14 0± 0 0 0 7和 7 12 0± 0 0 0 8,反义组pHi值分别为 6 990± 0 0 0 5、6 84 0± 0 0 0 5和 6 75 0±0 0 0 5 ,两组差异均有极显著性 (P <0 0 1)。A5 4 9组、空载体组和反义组的细胞倍增时间分别为 3 2 0、3 2 8和 4 97d ,反义组细胞的增殖、生长明显慢于A5 4 9组及空载体组 (P <0 0 1)。反义组细胞凋亡率为 (2 4
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