TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的:本研究旨在明确转化生长因子β1(TGF-β1)诱导鼠肝细胞凋亡与caspase-3及caspase-8的关系。方法:通过50%CCl4腹腔注射,用8W时间诱发BALB/c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGFβ1(5ng/ml)诱导的凋亡,利用1.5%的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带,应用DNA荧光染料Hoechst33342对正常肝细胞进行了染色,并在荧光显微镜下观察比较caspase3和caspase8在TGF-β1诱导的凋亡中的作用。结果:胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为95.2%。正常肝细胞予以TGFβ1处理后,应用1.5%的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGFβ1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现,其凋亡率明显高于未处理组,分别为58.76%和18.03%,两组具有明显的差别。但凋亡可以被caspase3和caspase8抑制剂阻止。结论:硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF-β1诱导的凋亡,提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF-β1通过caspase-8和caspase-3的活化诱导鼠肝细胞产生凋亡。