水稻钙依赖型蛋白激酶OsCPK9基因RNAi表达载体的构建及遗传转化

被引：9

作者：

韦淑亚 ^{[1
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张莹莹 ^{[1
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赵旭东 ^{[1
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刘小东 ^{[1
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罗青晨 ^{[1
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卫秋慧 ^{[1
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陈鹏 ^{[2
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何光源 ^{[1
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杨广笑 ^{[1
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机构：

[1] 科技部国际科技合作基地(基因工程),分子生物物理学教育部重点实验室,华中科技大学生命科学与技术学院

[2] 广西大学农学院

来源：

基因组学与应用生物学 | 2013年 / 32卷 / 05期

关键词：

OsCPK9; 水稻; RNAi; CDPK; 遗传转化;

D O I：

暂无

中图分类号：

S511 [稻];

学科分类号：

摘要：

水稻钙依赖型蛋白激酶(CDPKs)是一个响应逆境胁迫并在植物发育过程中起重要作用的蛋白激酶。我们采用RT-PCR从水稻品种日本晴(Oryza sativa L.cv.Nipponbare)中克隆了OsCPK9基因靠近翻译起始位点下游的一段280 bp的特异基因片段。将该片段以正、反向分别连接到来源于小麦TAK14基因的548 bp内含子片段(NCBI accession number:AF325198)两侧,从而获得pSK-OsCPK9-RNAi的中间表达载体。进而将其克隆到植物双元表达载体pCAMBIA1301中,构建shRNAi表达载体pCAMBIA-OsCPK9-RNAi。经酶切和测序鉴定正确后,利用农杆菌介导转化水稻。通过抗性筛选和标记基因hyg和gus进行PCR鉴定,筛选到20株转基因水稻植株,实时荧光定量PCR分析显示,部分转基因植株OsCPK9的表达受到显著抑制。

引用

页码：581 / 588

页数：8

共 5 条

[1] Functional characterisation of OsCPK21, a calcium-dependent protein kinase that confers salt tolerance in rice[J] . Takayuki Asano,Makoto Hakata,Hidemitsu Nakamura,Naohiro Aoki,Setsuko Komatsu,Hiroaki Ichikawa,Hirohiko Hirochika,Ryu Ohsugi.Plant Molecular Biology . 2011 (1)
[2] Expression analysis of calcium-dependent protein kinase gene family during reproductive development and abiotic stress conditions in rice ( Oryza sativa L. ssp. indica )[J] . Swatismita Ray,Pinky Agarwal,Rita Arora,Sanjay Kapoor,Akhilesh K. Tyagi.Molecular Genetics and Genomics . 2007 (5)
[3] Over-expression of calcium-dependent protein kinase 13 and calreticulin interacting protein 1 confers cold tolerance on rice plants
Komatsu, Setsuko
Yang, Guangxiao
Khan, Monowar
Onodera, Haruko
Toki, Seiichi
Yamaguchi, Masayuki
[J]. MOLECULAR GENETICS AND GENOMICS, 2007, 277 (06) : 713 - 723
[4] Construct design for efficient, effective and high‐throughput gene silencing in plants[J] . S. VarshaWesley,Christopher A.Helliwell,Neil A.Smith,MingBoWang,Dean T.Rouse,QingLiu,Paul S.Gooding,Surinder P.Singh,DavidAbbott,Peter A.Stoutjesdijk,Simon P.Robinson,Andrew P.Gleave,Allan G.Green,Peter M.Waterhouse.The Plant Journal . 2001 (6)
[5] The RNA-mediated silencing of one of the Pin genes in allohexaploid wheat simultaneously decreases the expression of the other, and increases grain hardness .2 Gasparis Sebastian,Orczyk Waclaw,Zalewski Wojciech,Nadolska-Orczyk Anna. Journal of experimental botany . 2011

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