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糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建
被引：7
作者：
赵晓山
罗仁
薛耀明
张曦倩
代方国
崔丽娟
傅婷婷
机构：
[1] 第一军医大学南方医院中医科,第一军医大学南方医院中医科,第一军医大学南方医院中医科,第一军医大学南方医院中医科,第一军医大学南方医院中医科,第一军医大学南方医院中医科,第一军医大学南方医院中医科,广东广州,,广东广州,,广东广州,,广东广州,,广东广州,,广东广州,,广东广州
来源：
基金：
广东省科技计划;
关键词：
糖尿病肾病;
肾阴虚证;
抑制性消减杂交;
基因组消减文库;
D O I：
10.13193/j.archtcm.2004.07.49.zhaoxsh.026
中图分类号：
R259 [现代医学内科疾病];
学科分类号：
100506 ;
摘要：
在多年糖尿病肾病 (diabeticnephropathy ,DN)肾虚证的研究中 ,结果发现血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotensinI -convertingenzyme,ACE)基因多态性与肾阴虚证密切相关[1 ] 。这提示肾阴虚证存在其相关基因。目前克隆疾病的相关基因有多种方法 ,其中抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)对研究复杂基因组的差异基因具有一定的优越性。目的 :采用抑制性消减杂交技术 (suppressionsub tractivehybridization ,SSH)构建汉族人糖尿病肾病 (diabeticnephropathy ,DN)肾阴虚证DNA消减文库。方法 :选择汉族DN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组 ,进行正向和反向消减杂交。用硅胶法抽提血白细胞DNA ,用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段 ,分别与两种不同的接头连接 ,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将PCR产物与U载体连接 ,经蓝白斑筛选后 ,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒 ,构建DN肾阴虚证DNA消减文库。结果 :用SSH方法筛选出了DN肾阴虚证的差异DNA片段 ,得到 5 86个白色克隆 ,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒 ,从而成功地构建了DN肾阴虚证的DNA消减文库。结论 :SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DN肾阴虚证DNA消减文库 ,为进一步筛选和克隆DN肾阴虚证
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