黄芩苷通过调控巨噬细胞M2极化对脊髓损伤大鼠炎症反应的抑制作用

目的:探讨黄芩苷对大鼠脊髓损伤（SCI）的保护作用,阐明其作用机制。方法:体内实验应用改良Allen氏打击法建立大鼠SCI模型,50只健康SD大鼠随机分为假手术组（给予生理盐水）、模型组（给予生理盐水,建立SCI模型）、黄芩苷组（SCI大鼠给予200 mg·kg-1黄芩苷）、黄芬苷+DMSO组（SCI大鼠给予200 mg·kg-1黄芩苷和0.2%DMSO）和黄芩苷+AS1517499 （STAT6通路抑制剂）组（SCI大鼠给予200 mg·kg-1黄芩苷和10 mg·kg-1 AS1517499）,每组10只。造模成功后用贝索-比蒂-布雷斯纳汉（BBB）评分评价大鼠脊髓运动功能。体外实验用2.5μg·L-1脂多糖（LPS）和0.125μg·L-1干扰素γ（IFN-γ）诱导巨噬细胞（RAW264.7）M1型极化,10μg·L-1白细胞介素4 （IL-4）诱导RAW264.7细胞M2型极化。RAW264.7细胞分为对照组、M1型极化组、M2型极化组、M1型极化+黄芩苷组、M2型极化+黄芩苷组、M1型极化+黄芩苷+DMSO组和M1型极化+黄芩苷+AS1517499组。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠脊髓组织和RAW264.7细胞中炎症因子[白细胞介素12 （IL-12）、TNF-α、IL-4和白细胞介素10 （IL-10）]水平,Western blotting法检测大鼠脊髓组织和RAW264.7细胞中M1型巨噬细胞标记蛋白[诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和趋化因子5 （CCL-5）]及M2型巨噬细胞标记蛋白[精氨酸酶1 （Arg1）、甘露糖受体C1（MRC1）和Janus激酶1/信号转导及转录激活蛋白6 （JAK1/STAT6）通路相关蛋白]表达水平。结果:体内实验,与模型组比较,黄芩苷组大鼠BBB评分明显升高（P<0.05）,脊髓组织中IL-12和TNF-α水平及iNOS、CCL-5和磷酸化信号转导及转录激活蛋白1 （p-STAT1）蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,IL-4和IL-10水平及Arg1、MRC1、磷酸化JAK1 （p-JAK1）和磷酸化STAT6（p-STAT6）蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）;与黄芩苷+DMSO组比较,黄芩苷+AS1517499组大鼠脊髓组织中IL-12和TNF-α水平及iNOS、CCL-5和p-STAT1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,IL-4和IL-10水平及Arg1、MRC1和p-STAT6蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。体外实验,与M1型极化组比较,M1型极化+黄芩苷组RAW264.7细胞中iNOS、CCL-5和p-STAT1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p-JAKl和p-STAT6蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与M2型极化组比较,M2型极化+黄芩苷组RAW264.7细胞中Arg1和MRC1蛋白表达水平明显升高（P<O.05）;与M1型极化+黄芩苷+DMSO组比较,M1型极化+黄芩苷+AS1517499组RAW264.7细胞中IL-12和TNF-α水平明显升高（P<0.05）,IL-4和IL-10水平明显降低（P<0.05）,p-JAK1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,p-STAT6、Arg1和MRC1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,iNOS和CCL-5蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论:黄芩苷通过促进巨噬细胞M2型极化,激活JAK1/STAT6通路,对SCI大鼠炎症反应起到一定抑制作用。