信号肽捕获系统的建立

被引:9
作者
孙强
王冀姝
李荣
周鹏
黄红艳
韩骅
机构
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关键词
蔗糖转换酶; 同源重组; 信号肽; 基因克隆;
D O I
暂无
中图分类号
Q785 [转化及克隆]; Q789 [基因工程的应用];
学科分类号
摘要
细胞分泌性蛋白的分泌有赖于蛋白质N端的信号肽的存在。利用酵母建立了从cDNA文库中筛选编码信号肽的基因片段的遗传系统。为此,用一步基因破坏法对酿酒酵母EGY48基因组中的suc 2基因(编码酵母蔗糖转换酶)进行了定位突变,获得了无蔗糖转换酶表达的酵母株EGY48-△ suc。将无信号肽的suc 2成熟肽基因克隆于酵母乙醇脱氢酶(ADH1)基因启动子下游,得到用于文库筛选的酵母真核表达载体。启动子与成熟肽基因之间为多克隆位点,用于插入待筛选的cDNA文库。用此载体转化酵母EGY48-△ suc,所得克隆可在以葡萄糖为碳源的培养基上生长,但不能在以棉子糖为碳源的培养基上生长;在suc 2成熟肽基因前分别插入suc 2信号肽基因片段或人IL-2受体α 链信号肽基因片段,然后转染EGY48-△ suc,所得克隆既能在以葡萄糖为碳源的培养基上生长,也能在以棉子糖为碳源的培养基上生长。表明构建的系统可用于筛选插入多克隆位点的cDNA片段是否具有编码信号肽的功能。
引用
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页数:6
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共 4 条
[1]   核定位信号筛选系统的构建 [J].
王冀姝 ;
陈萍 ;
孙强 ;
牛立国 ;
周鹏 ;
张浩 ;
韩骅 ;
苏成芝 .
中国生物化学与分子生物学报, 2000, (03) :301-305
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