碱性成纤维细胞生长因子对国产多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型维持及去分化的影响

目的对比不同浓度碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）对国产多孔钽-软骨细胞复合物维持软骨细胞表型和去分化作用的影响。方法分离培养3周龄新西兰幼兔膝关节软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、番红O（Safranin O）染色鉴定软骨细胞;取第3代软骨细胞分为5组:A组（1ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞）,B组（10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞）,C组（50ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞）,D组（多孔钽-软骨细胞）及E组（软骨细胞）;MTT法检测不同浓度bFGF对多孔钽-软骨细胞生长及增殖状态的影响;扫描电镜观察bFGF-多孔钽-软骨细胞复合物细胞形态及生长;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色检测软骨细胞表型变化及去分化状态;real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达。结果Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色及Safranin O染色均呈阳性反应,证实所分离培养的细胞为软骨细胞;1、10、50ng/mL bFGF均可促进软骨细胞增殖,各实验组（AD组）软骨细胞增殖与对照组（E组）相比,差异有统计学意义,其中10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞增殖最为明显（P<0.05）;组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;扫描电镜观察:各组软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长、黏附,早期呈不等的球形,24h后胞质延展并向周围伸出多条突起,相互连接、延展向孔隙内部生长,细胞间相互融合并覆盖支架材料;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ和Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色显示10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞组（B组）Ⅱ和Ⅸ型胶原表达高于对照组（E组,P<0.05）,组间差异也有统计学意义（P<0.05）;而Ⅰ和Ⅹ型胶原表达则低于对照组（E组,P<0.05）;real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达显示:各实验组（AD组）Ⅱ型胶原mRNA的表达高于对照组（E组,P<0.05）,而Ⅹ型胶原mRNA表达量则低于对照组（E组,P<0.05）。结论 bFGF能维持多孔钽-软骨细胞复合物软骨细胞表型,抑制去分化,加强软骨细胞分泌功能。