融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用

被引：2

作者：

刘冬光 ^{[1
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廖娟红 ^{[1
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于清龙 ^{[1
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陈颖钰 ^{[1
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陈焕春 ^{[1
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郭爱珍 ^{[1
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机构：

[1] 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

[2] 华中农业大学动物医学院

来源：

中国奶牛 | 2009年 / 10期

关键词：

牛结核; Rv3872; CFP-10; ESAT-6; 诊断;

D O I：

暂无

中图分类号：

S858.23 [牛];

学科分类号：

摘要：

本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6蛋白,以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6,提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法,克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因,通过酶切连接方法,将三个基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接。融合基因在大肠杆菌内经IPTG0.4mmol/L诱导3h,目的蛋白经SDS-PAGE证实表达在上清中,Western-blot分析证实表达蛋白具有免疫原性。以所表达的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA,检测了44份牛分枝杆菌感染背景清楚的临床奶牛血清。26份阳性血清中,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA检出阳性样本18份,检测灵敏度为69%,而CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA只检出阳性样本4份。18份阴性血清中,两种ELISA均检出17份阴性血清,特异性都为94%(17/18)。因此,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白在对牛结核抗体检测特异性没有降低的情况下,敏感性获得了显著提高,这对牛结核病的早期鉴别诊断方法的建立具有重要意义。

引用

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页数：5

共 5 条

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