Cx43基因干扰对大鼠星形胶质细胞谷氨酸基础释放的影响

被引：13

作者：

王凌云

田衍平

牛建钦

肖岚

机构：

[1] 第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室

来源：

第三军医大学学报 | 2012年 / 34卷 / 08期

关键词：

连接蛋白43; siRNA; 星形胶质细胞; 谷氨酸;

D O I：

10.16016/j.1000-5404.2012.08.005

中图分类号：

R-332 [医用实验动物学];

学科分类号：

100402 [劳动卫生与环境卫生学];

摘要：

目的构建能有效抑制大鼠星形胶质细胞(astrocytes,ASTs)连接蛋白43(connexin 43,Cx43)基因表达的siRNA载体,并检测抑制Cx43表达对星形胶质细胞谷氨酸释放的影响。方法合成针对大鼠Cx43基因的siRNA寡核苷酸,构建pGCsi.U6.neo.GFP质粒载体。质粒通过电转方法转染原代星形胶质细胞后,用免疫荧光染色及Western blot检测转染干扰质粒对大鼠ASTs Cx43蛋白表达的影响。用谷氨酸ELISA定量试剂盒检测释放至培养基中谷氨酸的浓度,并用DAPI染色进行细胞计数。结果测序结果显示,Cx43基因的目的片段正确插入载体,并保持正确的读码框。干扰质粒转染ASTs 48 h后与对照组相比,Cx43蛋白表达明显下降(P<0.05),细胞存活未受影响,而谷氨酸释放明显减少(P<0.05)。结论成功构建了抑制大鼠Cx43基因表达的siRNA载体,抑制Cx43表达可降低ASTs谷氨酸的基础释放。

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页码：701 / 704

页数：4

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共 4 条

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