人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用

目的:将人参总皂苷或人参总皂苷与白细胞介素1联合处理的神经干细胞移植到帕金森病模型小鼠纹状体内,观察人参总皂苷在移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用。方法:实验于2004-09/2005-07在重庆医科大学基础医学研究所重庆市生物化学与分子药理重点实验室完成。①从7～12周龄流产胚胎脑中分离皮质细胞,体外培养,纯化,分别用鼠抗人nestin抗体行免疫细胞化学染色,鉴定神经干细胞,并用4,6-二乙酰基-2苯基吲哚标记细胞。②人参总皂苷与人神经干细胞的体外培养,实验分组:神经干细胞组,常规培养神经干细胞;人参总皂苷组,常规培养体系中加入人参总皂苷(终浓度200mg/L);人参总皂苷+白细胞介素1组,在人参总皂苷组培养体系中加入白细胞介素1(终浓度200ng/L),均培养3d,待移植用。③健康清洁级小鼠20只,腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四羟吡啶(30mg/kg),建立帕金森病小鼠模型。记录小鼠震颤麻痹评分,自发活动和记忆功能,对模型进行评价。④将经人参总皂苷处理的神经干细胞,按所分实验组注入帕金森病小鼠纹状体内,同时设立磷酸盐缓冲液组(注入同体积磷酸盐缓冲液),移植后60d观测模型鼠行为学改变情况;荧光显微镜下观察移植的神经干细胞在帕金森病模型鼠脑内分布和迁移;酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色,对移植的神经干细胞在脑内分化为多巴胺能神经元样细胞进行检测。结果:①从流产人胚胎脑组织中分离、纯化的神经干细胞细胞,经3代以上的传代纯化培养,神经球nestin呈阳性表达,所有神经干细胞细胞核标记上蓝色荧光,标记率达100%。②20只小鼠均建模成功。③神经干细胞组、人参总皂苷组、人参总皂苷+白细胞介素1组神经干细胞移植后帕金森病小鼠5min自发活动的次数均多于对照组(52.0±1.6,81.0±2.8,98.0±3.7,P<0.05或0.01)。④震颤麻痹评分(每组对照均为2分1只,3分4只),磷酸盐缓冲液组2分1只,3分4只;神经干细胞组2分3只,3分2只;人参总皂苷组2分4只,3分1只;人参总皂苷+白细胞介素1组1分2只,2分2只,3分1只。⑤移植的神经干细胞在帕金森病模型鼠脑内分布和迁移以及分化多巴胺能神经元样细胞的检测显示,人参总皂苷+白细胞介素1组优于人参总皂苷组,人参总皂苷组优于神经干细胞组,磷酸盐缓冲液组无作用。结论:人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病中发挥促进作用。