RAPD技术在药用植物绞股蓝鉴别中的初步研究

运用RAPD技术对绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)及其伪品进行DNA指纹图谱的鉴别研究。采用改进的CTAB法提取七叶绞股蓝、五叶绞股蓝、乌蔹莓(Cayratia japonica)3种植物的总DNA,主要以七叶绞股蓝DNA为模板,采用随机引物WGS001进行PCR扩增,对反应体系包括模板、Mg2+、Taq酶、牛血清白蛋白(BSA)、退火温度进行优化。优化的反应体系总体积25μL,含MgCl22 mmol/L、dNTP 0.2 mmol/L、引物0.4μmol/L、模板60 ng、Taq酶1 U、BSA2μg/μL,退火温度58℃。用10条含20个碱基的随机引物对以上3种植物总DNA作PCR扩增,进行引物筛选。筛选得到的两条随机引物(WGS001、WGS004)可扩增得到识别这些物种基因组DNA的多态性片段。这些片段可以有效地鉴别绞股蓝和乌蔹莓。