嗜碱芽孢杆菌N16-5 β-甘露聚糖酶的纯化与性质

嗜碱芽孢杆菌（Bacillus sp.）N16-5产生的三种胞外碱性β-甘露聚糖酶（β-mannana-se）经硫酸铵沉淀、两次 DEAE-Sephadex A-25离子交换柱层析、羟基磷灰石吸附柱层析及制备 PAGE 等步骤,得到了凝胶电泳均一的样品。用 SDS-PAGE 测得纯化的β-甘露聚糖酶M-1、M-2和 M-3的分子量分别为51000、38000和34700道尔顿。用 PAGEIEF 测得等电点 pI 分别为4.3、2.5和2.5。酶反应的最适 pH 为9.0（M-1）和10.0（M-2和 M-3）;三种酶的最适温度均为70℃;稳定 pH 为10.0左右（M-1和 M-2）、8.0—10.0（M-3）;M-1、M-2和 M-3的稳定温度分别为40、55和50℃。金属离子 Ag+、Hg2+和 Mn2+对三种酶均有抑制作用。β-甘露聚糖酶 M-1、M-2和 M-3对魔芋葡萄甘露聚糖作用的 Km 分别为2.9、1.7和12.5mg/ml,Vmax值分别为27500、47500和15700mol·min-1·mg-1。β-甘露聚糖酶 M-1水解魔芋葡萄甘露聚糖产生单糖、双糖、三糖和四糖等低聚糖。