应用多重TaqMan MGB探针实时聚合酶链反应检测A型和B型流感病毒的研究

被引:6
作者
张欣
倪汉忠
郑夔
柯昌文
林锦炎
机构
[1] 广东省疾病预防控制中心微生物检验所
关键词
正粘病毒科; 多重实时PCR; TaqMan MGB探针;
D O I
暂无
中图分类号
R450 [];
学科分类号
100215 ;
摘要
目的应用多重real-time PCR方法检测A型和B型流感病毒,探讨其在快速诊断流感病毒感染中的优越性。方法根据A型和B型流感病毒M基因的相对保守序列,设计两套特异性引物和TaqManMGB探针,进行多重real-time PCR检测A型和B型流感病毒。将该方法与病毒分离、免疫层析、传统RT-PCR进行比较,并对多重real-time PCR的特异性进行评估。并应用multiplexreal-time PCR方法和常规的病毒分离方法对广东省流感样病例334份咽拭标本进行检测,比较其灵敏性和特异性。结果多重real-time PCR反应可以检测到A、B型流感病毒的最低病毒量分别为10-1和10-3TCID50/反应。该方法在对流感病毒株以及其他呼吸道病毒株样品的检测中,未发现假阳性和假阴性现象,特异性为100%。该方法对334份临床标本进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定结合血清学检测)的符合率达100%,且灵敏度明显高于病毒分离。结论该研究建立的多重TaqManMGB real-time PCR是一种快速、灵敏性和特异性高的流感病毒检测方法,对于流感的早期诊断及指导临床有重要意义。
引用
收藏
页码:21 / 25
页数:5
相关论文
共 5 条
[1]  
3’-Minorgroove binder-DNA probes increase sequence specificity at PCRextension temperatures. KUTYAVIN I V,,AFONINA I A,MILLS A,et al. Nucleic Acids Research . 2000
[2]  
Preparations for a pandemic of influenza. OWENS S R. EM-BO Rep . 2001
[3]  
Simul-taneous detection of influenza A,B and C viruses,respiratory syn-cytial virus,and adenoviruses in clinical samples by multiplex re-verse transcription nested-PCR assay. COIRAS MT,PEREZ-BRENAP,GQRCIAML,et al. Journal of Medical Virology . 2003
[4]  
Rapid identificationof nine microorganisms causing acute respiratory tract infections bysingle-tube multiplex reverse transcription-PCR:feasibilitystudy. GRONDAHI B,PUPPE W,HOPPE A,et al. Journal of Clinical Microbiology . 1999
[5]  
Respiratoryvirus infections after stem cell transplantation:a prospective studyfrom the Infectious Diseases Working Party of the European Groupfor Blood and Marrow Transplantation. LJUNGMAN P,WARD K N,CROOKS B N,et al. Bone Marrow Transplantation . 2001