黄芪丹参复方制剂对大鼠心肌线粒体氧自由基损伤的保护作用

目的:观察黄芪丹参复方制剂(芪丹通脉片)对盐酸异丙肾上腺素所致急性心肌缺血的防治作用。方法:①实验于2001-06在解放军第四军医大学病理生理实验室完成。选用32只SD大鼠,雌雄不拘。芪丹通脉片提取浸膏干粉(由黄芪、丹参、当归、桂枝、红花组成,1g干粉相当于生药2.86g),由西京医院提供。②随机将大鼠分为4组:正常对照组、模型组、芪丹通脉片组、硫氮卓酮组,每组8只。正常对照组:予生理盐水3mL/kg,每日灌服2次,连续14d。第15天,皮下三四点注射生理盐水,24h后相同方法、剂量注射生理盐水1次。模型组:用同样方法灌服生理盐水3mL/kg。第15天,皮下三四点注射盐酸异丙肾上腺素(5mg/kg),24h后相同方法、剂量注射盐酸异丙肾上腺素1次。芪丹通脉片组:灌服用蒸馏水配成3mL/kg的芪丹通脉片溶液2g/kg,用与模型组同样方法注射盐酸异丙肾上腺素。硫氮卓酮组:灌服用蒸馏水配成3mL/kg的硫氮卓酮(浙江亚太制药厂出品)5mg/kg,用与模型组同样方法,注射盐酸异丙肾上腺素。③用差速离心法提取心肌线粒体,考马斯亮蓝法测定蛋白含量。按南京建成生物工程研究所提供试剂盒说明测定线粒体中丙二醛含量,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力。按上海复星-长征医学有限公司所提供肌酸磷酸激酶试剂盒和上海长征-康仁医学有限公司所提供乳酸脱氢酶活性试剂盒提供的方法测定肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶活性。④苏木精-伊红染色,光镜下观察心肌病理变化,将病理损伤分为4级,0级:肌纤维排列整齐,横纹清晰,胞核明显,无细胞肿胀;Ⅰ级:心肌出现散在的坏死,主要为凝固性坏死,局限于心内膜下;Ⅱ级:心肌坏死灶呈片状分布,灶间无连接,病变累及心壁全层;Ⅲ级:心肌广泛性坏死,灶间相互连接,病变累及心壁全层;Ⅳ级:遍及整个心脏的融合性损伤,包括梗死样的广泛性坏死,偶有急性动脉瘤或附壁血栓。⑤实验数据采用方差分析,组间采用最小显著差数法进行两两比较。病理组织结果进行Ridit检验。结果:大鼠32只均进入结果分析。①在光镜下可以观察到,正常对照组心肌细胞形态正常,无炎细胞浸润;模型组心肌有片状坏死灶;芪丹通脉片组及硫氮卓酮组主要出现散在性点状坏死。②芪丹通脉片组和硫氮卓酮组心肌线粒体丙二醛含量明显低于模型组(P<0.01),超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力明显高于模型组(P<0.01)。模型组心肌线粒体丙二醛含量明显高于正常对照组(P<0.01),超氧化物歧化酶活力明显低于正常对照组(P<0.01)。③芪丹通脉片组和正常对照组心肌组织肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量明显高于模型组(P<0.01),血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶水平明显低于模型组(P<0.01)。④芪丹通脉片组与硫氮卓酮组心肌细胞病理损伤级别差异不明显,两组与模型组差异明显(P<0.05)。结论:芪丹通脉片可能是通过降低心肌线粒体中丙二醛含量,增加超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力,减轻氧自由基损伤,以达到保护心肌细胞的目的。