柿AFLP银染技术体系的建立

被引：4

作者：

王文江

张桂霞

崔惠英

张志华

机构：

[1] 河北农业大学山区研究所

[2] 天津农学院园艺系

[3] 河北省林业技术推广总站

[4] 河北农业大学山区研究所河北保定

[5] 天津

[6] 河北石家庄

[7] 河北保定

来源：

河北农业大学学报 | 2005年 / 02期

关键词：

柿; AFLP; 银染技术体系;

D O I：

暂无

中图分类号：

S665.2 [柿];

学科分类号：

090201 ;

摘要：

通过对各主要影响因素的研究,建立了适于柿AFLP分析的银染技术体系:酶切体系20μL总体积中含纯化后的DNA450ng,EcoRI和MseI各3U,37℃酶切4h;酶切完成后加入连接液,37℃连接10h(或过夜),然后65℃变性10min;连接产物稀释5倍用于预扩增,预扩增体系中EcoRI和MseI引物均不含选择性碱基;预扩增产物稀释5倍用于选择性扩增,选择性扩增体系中EcoRI和MseI引物均含3个选择性碱基,选择性扩增完成后,加入10μLLoadingbuffer,95℃变性10min,立即冰浴;取6 5μL变性后的选择性扩增产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,电泳完毕后,对胶板进行固定、脱色、水洗、银染、冲洗、显影、定影及干燥等银染程序。

引用

页码：9 / 14

页数：6

共 9 条

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