siRNA靶向沉默p22phox表达对内皮细胞衰老抑制作用的研究

被引：7

作者：

李虹 ^{[1
]}

白小涓 ^{[2
]}

刘强 ^{[3
]}

王宁夫 ^{[1
]}

机构：

[1] 杭州市第一人民医院南京医科大学附属杭州医院

[2] 中国医科大学附属第一医院

[3] 浙江大学医学院第二附属医院

来源：

遗传 | 2008年 / 09期

关键词：

血管紧张素Ⅱ; p22phox; 内皮细胞; 衰老; siRNA;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q343 [细胞遗传学];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

设计特异性siRNA(Short interference RNA)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞NAD(P)H氧化酶活性亚单位p22phox基因沉默,探讨p22phox基因沉默在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的ECV-304衰老中的作用及机理。应用体外转录合成3种siRNA转染体外培养的ECV-304,RT-PCR鉴定对p22phox基因沉默的效率和特异性,确立适宜的转染浓度和基因沉默的持续时间;ECV-304分为空白对照组、AngⅡ组、siRNA转染组、AngⅡ+siRNA转染组,观察细胞衰老改变及活性氧水平,分析各组细胞p22phox的mRNA及蛋白表达。结果表明:3种siRNA中,一种对p22phox mRNA表达抑制率达到83%,在一定转染浓度范围内,siRNA诱导的基因沉默效率呈剂量依赖性,抑制效率高峰期在24～36h;给予AngⅡ后,β-gal染色阳性细胞数显著增加,出现衰老的特征性改变,衰老细胞p22phox的mRNA及蛋白表达增加,伴有一氧化氮(NO)生成减少,活性氧生成增加,siRNA诱导p22phox基因沉默后降低了活性氧水平,增加NO生成,改善了AngⅡ诱导的ECV-304细胞的衰老改变。siRNA干扰技术可成功诱导NAD(P)H氧化酶p22phox基因沉默,从而减缓AngⅡ诱导体外培养的ECV-304衰老进程,p22phox是防治衰老有希望的分子靶点。

引用

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页码：1175 / 1181

页数：7

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[2]

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Touyz, RM ;

Chen, X ;

Tabet, F ;

Yao, GY ;

He, G ;

Quinn, MT ;

Pagano, PJ ;

Schiffrin, EL .

CIRCULATION RESEARCH, 2002, 90 (11) :1205-1213

[3]

Oncogenic ras provokes premature cell senescence associated with accumulation of p53 and p16(INK4a) [J].

Serrano, M ;

Lin, AW ;

McCurrach, ME ;

Beach, D ;

Lowe, SW .

CELL, 1997, 88 (05) :593-602