婴儿血中四种疱疹类病毒DNA及特异性IgM抗体检测

目的　建立 1种能快速区分 4种疱疹类病毒DNA的特异性酶切图谱。方法　在疱疹类病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中设计 1对通用引物 ,该引物能同时扩增单纯疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型 (HSVI/Ⅱ )、爱泼斯坦 巴尔病毒 (EBV)、人巨细胞病毒 (CMV) 4种病毒。选择BamHI和BstUI 2种内切酶对同一PCR产物进行酶切 ,建立了能区分 4种疱疹类病毒的PCR限制性内切酶片段长度多态性分析 (RFLP)法。采用PCR RFLP和ELISA法 ,对 75例怀疑病毒感染的患儿和 38名健康儿童的血标本进行上述 4种病毒DNA及IgM抗体检测。结果　 4种标准病毒株PCR扩增后产物为 5 10～ 5 92bp ,经酶切后能区分病毒种类 ,其最小检出量为 0 1fg ,与乙型肝炎病毒、新型隐球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌和人类基因组DNA无交叉反应。用该方法检测临床 75份血标本 ,阳性 2 3份 ,其中CMV、EBV和HSVⅡ感染分别为 13、4和 5例 ,HSVI为 1例 ,同时用ELISA法检测该标本 ,10例阳性 ,分别为CMV5例、EBV3例和HSVⅡ 2例。在 38例健康体检儿童的血标本中上述 4种病毒DNA及IgM抗体均为阴性。结论　本研究建立的 4种疱疹类病毒特异性酶切图谱具有特异敏感 ,快速准确的特点 ,能检测到ELISA法不能检测到的疱疹病毒感染。