人工合成Cecropin AD基因在酵母中表达

Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 是由Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ａ的Ｎ 端１ １１ 位氨基酸残基和Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｄ 的Ｃ 端１２ ３７ 位氨基酸残基构成的一个杂合肽，抗菌活性高于天然抗菌肽。根据Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 的氨基酸序列，以酵母偏爱密码设计了Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因，全长１４０ｂｐ 。采用基因片段化学合成结合ＰＣＲ 法合成Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因。合成的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因克隆到ｐＣＲＴＭ２１ 上，进行ＤＮＡ 序列测定，证实合成的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因的ＤＮＡ 序列与设计序列完全一致。将Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因定向克隆到大肠杆菌 酵母穿梭质粒ｐＣＬＷＡ２ 的Ｂａｍ ＨＩ和Ｓａｌ Ⅰ位点上，构建成含Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因的重组质粒ｐＣＡＤ，将重组质粒转化入宿主酵母ＡＢ１０３ ，以大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１ 为指示菌，用活性蛋白酸性ＰＡＧＥ 法测定，具有抑菌活性，表明Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因在酵母中获得表达。