GSB中药血清对rMSCs定向诱导分化为成骨细胞的影响

目的观察GSB中药血清对大鼠MSCs定向诱导分化成骨的影响。方法将培养的rMSCs分为对照组(C组)[含10%胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的完全培养液]、诱导组(O组)[完全培养液,加诱导培养液(0.1μmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠及50μg/ml维生素C),加20%空白血清]和含药血清诱导组(G组)[完全培养液加诱导培养液诱导培养液中加入20%含药血清)。显微镜下观察细胞形态变化,生化法测定上清中Ca2+浓度,Gomori改良钙钴法进行ALP染色,Von Kossa法进行矿化结节染色,RT-PCR法测定I型胶原(COLL1)和脂蛋白脂酶(LPL)的表达,放免法测定上清中骨钙素含量。结果O组和G组在加入诱导培养液3～4天后梭形细胞比例减少,细胞变形成多角形、乃至方形,部分区域细胞成多层生长;改良Gomori钙钻法碱性磷酸酶染色阳性细胞,Von Kassa染色发现钙盐沉积;培养9d后细胞Ca2+浓度开始升高,并随时间持续显著增长,且G组明显高于O组。自第15d后,O组和G组细胞ALP活性随时间延长而明显增高,且G组显著高于O组;培养的第14d,G组骨钙素分泌量明显高于O组。成骨诱导剂作用MSCs12d后,COLLI mRNA表达阳性,LPL mRNA表达阴性,且G组比O组COLLI mRNA表达更强。结论补肾填精中药GSB促进骨钙素分泌、增强ALP活性、促钙盐沉积,具有增强成骨诱导剂诱导rMSCs向成骨细胞分化,并促进成骨细胞成熟作用。