重组人内皮抑素的表达、纯化、复性方法研究

[目的]摸索重组人内皮抑素(recombinanthumanendostatin,rhES)的最佳生产工艺路线,解决rhES在大肠杆菌中表达提取的蛋白变性问题。[方法](1)按所优化的条件进行rhES的表达,包涵体的提取、洗涤、变性、复性。(2)活性检测:观察rhES对裸鼠皮下移植瘤生长情况及病理组织学的影响。[结果](1)每升培养基可得可溶性rhES蛋白10.55mg,rhES在大肠杆菌中的表达量超过总菌体蛋白的60%,纯化后的蛋白纯度超过95%。(2)动物实验:rhES抑瘤效果显著,抑瘤率为45.86%,实验组与对照组在肿瘤体积、重量、裸鼠除瘤净重、瘤重/鼠净重4个指标上均有显著性差异(P<0.01)。光镜见实验组微血管密度降低,坏死面积增加,电镜见实验组凋亡细胞增加。[结论]本实验所优化的生产工艺路线可获得可溶性的、高纯度、高活性的rhES蛋白,解决了rhES在大肠杆菌中提取时的蛋白变性问题。