右归饮含药血清对骨髓间充质干细胞成软骨分化的促进作用及其microRNA表达谱分析

目的:观察右归饮含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的效应,分析此过程中的micro RNA表达谱变化,探讨右归饮含药血清促进BMSCs成软骨分化的分子机制。方法:体外培养大鼠BMSCs,经TGF-β1基因慢病毒转染后48h给开始右归饮含药血清干预,培养7d,采用Ⅱ型胶原免疫组化染色、甲苯胺蓝染色、Real time PCR方法检测Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖的表达。采用micro RNA芯片技术和生物信息学方法,分析差异micro RNA表达谱变化,预测关键micro RNA、信号通路及靶基因。结果:TGF-β1基因成功转染BMSCs并能稳定表达。转染组和右归饮组的甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性,空载组染色均为阴性;与空载组比较,转染组和右归饮组Ⅱ型胶原m RNA、聚集蛋白聚糖m RNA的表达上调(P<0.01);与转染组比较,右归饮组Ⅱ型胶原m RNA、聚集蛋白聚糖m RNA的表达上调(P<0.01)。右归饮组与转染组相比,17个micro RNA个显著上调,2个micro RNA显著下调(P<0.05,|fold change︱≥0.585)。mi R-24-3p、MAPK信号通路及MAPK13、MAPK14、TRAF6、MAP3K7基因被预测为关键micro RNA、信号通路及靶基因。结论:右归饮含药血清能较好地促进BMSCs成软骨分化,右归饮通过上调mi R-24-3p阻断MAPK信号通路可能发挥了重要作用。