犬瘟热病毒A株核衣壳蛋白基因的克隆、表达及特性分析

被引：13

作者：

周洁

李昌文

张洪英

陈洪岩

李建伟

曲连东

机构：

[1] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心

来源：

中国预防兽医学报 | 2006年 / 04期

关键词：

犬瘟热病毒; 核衣壳蛋白; 表达; 反应活性; 多克隆抗体;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.65 [家畜病毒学];

学科分类号：

090601 ;

摘要：

根据GenBank中A75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因定向克隆于原核表达载体pPROEXTMHT,用重组质粒pPROEXTMHT-N转化感受态E.coliDH5a细胞,用IPTG于37℃诱导表达了分子量约63Ku的重组N蛋白,占菌体总蛋白18%。经Westernblot分析证实所表达的重组N蛋白具反应活性,将表达产物用ProBondTM纯化试剂盒进行了纯化。用所获得的重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体可与CDV全病毒发生特异性反应,经琼扩试验测定其效价为1∶16。本实验为下一步用重组N蛋白作为诊断用抗原,建立特异的CDV抗体检测方法奠定了基础。

引用

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