甲基对硫磷水解酶的重组表达及其纯化和性质研究

被引：8

作者：

傅国平

崔中利

徐玮

吴旭平

李顺鹏

机构：

[1] 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室

[2] 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京南京经济学院食品科学与工程系南京

[3] 南京

来源：

微生物学报 | 2004年 / 03期

关键词：

甲基对硫磷水解酶; 基因表达; Ni-NTA亲和层析; 酶活性;

D O I：

10.13343/j.cnki.wsxb.2004.03.019

中图分类号：

Q55 [酶];

学科分类号：

071010 ; 081704 ;

摘要：

用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶编码基因 ,构建了重组表达质粒pET2 9ampd ,将其转化至EscherichiacoliBL2 1 （DE3）中 ,经IPTG诱导表达 ,得到C 末端含有 6个寡聚组氨酸的甲基对硫磷水解酶 ,用Ni NTA亲和层析纯化得到具有活性的甲基对硫磷水解酶。测定了环境因素对酶活性的影响及酶动力学参数。甲基对硫磷水解酶水解甲基对硫磷时 ,最适pH8 6～ 8 8,最佳反应温度 1 5℃ ;Mn2 + 、Zn2 + 、Cu2 + 可使酶活性增加 1 5 %～ 2 0 % ,Ca2 + 、Mg2 + 微弱地促进酶的作用 ,Ni2 + 对酶活性几乎无影响 ;1mmol LEDTA·Na2 + 几乎不影响酶的活性 ,而 1 0mmol LEDTA·Na2 + 对甲基对硫磷水解酶有较强的抑制作用。甲基对硫磷水解酶水解乙基对硫磷时 ,最适pH8 6。 2 5℃时 ,该酶对甲基对硫磷的米氏常数Km 为（6 8 6± 5 1 ） μmol L ,kcat为（4 5± 6 ）S- 1 ;对乙基对硫磷的米氏常数Km 为（5 9 5± 6 0 ）μmol L ,kcat为（8± 1 ）S- 1 。kcat Km 表明甲基对硫磷水解酶对甲基对硫磷的催化效率更高

引用

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