凝血酶对培养大鼠皮层神经细胞的毒性作用研究

目的　通过研究凝血酶对培养神经细胞的毒性作用 ,探讨脑出血凝血酶致神经细胞损伤的机制。方法　采用新生 1～ 2d大鼠皮层神经元进行原代分散培养 ,分别在含 15 0U ml凝血酶、15 0U ml凝血酶 +15 0U ml重组水蛭素以及正常的培养液中孵育 3d后测定下列指标 :①甲苯胺蓝染色法测定残存细胞数并计算神经细胞丧失率 ;②TdT介导的dUTP缺口末端标记法检测TUNEL阳性细胞的表达 ;③免疫组化二步法测caspase 3免疫反应性 (ImmuneReactivity ,IR)细胞的表达 ;④培养上清液中乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果　凝血酶组较水蛭素干预组及对照组神经细胞明显减少 (P <0 0 5 ) ;凝血酶组有较多的TUNEL阳性细胞及caspase 3IR细胞表达 ,并明显多于对照组及水蛭素干预组 (P <0 .0 5 ) ,凝血酶组TUNEL阳性细胞比率及caspase 3IR细胞比率明显高于对照组及水蛭素干预组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;与实验前相比 ,实验三组各组LDH活性均升高 (P <0 .0 5 ) ,三组间两两比较LDH活性无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论　 15 0U ml的凝血酶可导致培养的神经细胞死亡 ,并可被凝血酶的特异抑制剂水蛭素阻断 ,细胞死亡的原因可能为细胞凋亡而非坏死 ,脑出血后凝血酶的释放是脑出血神经细胞凋亡性损伤的机制之一。