巢式甲基化特异性聚合酶链反应在p16基因启动子过甲基化检测中的应用

被引：16

作者：

姚群峰

康新江

宁勇

唐朝晖

周宜开

机构：

[1] 华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境医学研究所

[2] 华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境医学研究所武汉

[3] 武汉

来源：

中华检验医学杂志 | 2004年 / 02期

基金：

国家自然科学基金重大项目;

关键词：

甲基化; 基因p16; 聚合酶链反应;

D O I：

暂无

中图分类号：

R446.9 [其他];

学科分类号：

100208 [临床检验诊断学];

摘要：

目的　介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应 (nMSP)法 ,探讨了最佳PCR扩增条件 ,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法　将基因组DNA变性成为单链 ,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA ,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶 ,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物 ,进行巢式聚合酶链反应扩增 ,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果　在 3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化。用甲基化特异性聚合酶链反应法 (MSP)和nMSP法分别检测 34例非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血清 ,p16基因启动子甲基化阳性率分别为 5 3% (18/34)和 74 % (2 5 /34) ,nMSP法具有更高的灵敏度。结论　筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法 ,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。

引用

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