肾癌抑制性消减杂交文库的构建及意义

被引：4

作者：

艾军魁

陈琳

黄啸

张勇

张强

果宏峰

梁丽莉

那彦群

张志文

郭应禄

机构：

[1] 北京大学第一医院泌尿外科北京大学泌尿外科研究所

[2] 福建省血液病研究所

[3] 北京大学第一医院泌尿外科北京大学泌尿外

来源：

中华泌尿外科杂志 | 2002年 / 09期

关键词：

肾肿瘤; 癌; 基因; 杂交; 文库;

D O I：

暂无

中图分类号：

R737.11 [肾、肾盂肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的　应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌组织与正常肾组织间差异表达的cDNA组成的消减文库。　方法　分别从肾癌组织和正常肾组织提取polyA+ RNA ,合成双链cDNA ,经RsaI酶切后将肾癌cDNA分为两组并加上不同的DNA接头 ,再与过量正常肾组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌构建成cDNA消减文库 ,文库扩增后随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析。　结果　文库共包含 4 14个阳性克隆 ,随机挑取 2 6 5个阳性克隆提取质粒并酶切分析 ,其中 2 4 6个克隆有插入片段。将其中 4 0个克隆进行测序 ,表明 1个克隆为新基因片段 ,其余 39个源于 35个已知基因。　结论　该消减杂交文库质量可靠 ,它的成功构建为进一步筛选、克隆肾癌差异表达基因提供了依据

引用

页码：4 / 7

页数：4

共 7 条

[1]

Analysis of differentially expressed genes in human hepatocellular carcinoma using suppression subtractive hybridization. Miyasaka Y,Enomoto N,Nagayama K,et al. British Journal of Cancer . 2001

[2]

Use of suppression subtractive hybridization strategy for cloning and Identifying specifically expressed genes of renal cell carcinoma. Zhang Q,Zhang ZW,Gong K,et al. Chinese Science Bulletin . 2001

[3]

GENE[P]. 韩国专利:KR20010023509A,2001-03-26

[4]

A profile of differentially expressed genes in primary colorectal cancer using suppression subtractive hybridization. Hufton SE,Moerkerk PT,Brandwijk R,et al. FEBS Letters . 1999

[5]

Pro-inflammatory and T cell inhibitory cytokines are secreted at high levels in tumor cell cultures of human renal cell carcinoma. Lahn M,Fisch P,Kohler G,et al. European Urology . 1999

[6]

Equalizing cDNA subtraction based on selective suppression of polymerase chain reaction: cloning of Jurkat cell transcripts induced by phytohemagglutinin and phorbol 12myristaie 13-acetaie. Gurskaya NG,Diatchenko L,Chenchik A,et al. Analytical Biochemistry . 1996

[7]

Transforming growth factor beta 1 is significantly elevated in plasma of patients suffering from renal cell carcinoma. Junker U,Knoefel B,Nuske K,et al. Cytokine . 1996

← 1 →