猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-la株N基因的分子克隆、序列测定及其比较分析

根据已发表的ＰＲＲＳＶＩＡＦ－ｅｘｐ９１株的核酸序列，设计了一对特异性引物，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了ＰＲＲＳＶＣＨ－ｌａ株的Ｎ基因，经补平和磷酸化后，克隆到ｐＵＣ１８ＳｍａＩ位点上。经电泳分析、酶切和ＰＣＲ鉴定证实后，进行序列测定。序列分析表明ＣＨ－ｌａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株（美洲型）Ｎ基因核苷酸同一性为９３．２％，氨基酸同一性高达９６．７％，而与ＬＶ株（欧洲株）核苷酸同一性为６３％，氨基酸同一性仅为５９％。其推导氨基酸残基分子量为１３．３ｋＤａ。根据ＣＨ－ｌａ株Ｎ基因推导的氨基酸残基缺少欧洲型毒株ＬＶ特有的两个氨基酸片段，表明ＣＨ－１ａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株同源性高于它与ＬＶ株的同源性，而且ＣＨ－１ａ株与鼠乳糖脱氢酶增高症病毒（ＬＤＶ）在进化关系上比ＬＶ株与ＬＤＶ更密切。ＣＨ－１ａ株Ｎ基因推导的氨基酸残基Ｎ－端１／２段约２６％是由Ａｒｇ、Ｌｙｓ和Ｈｉｓ这３种氨基酸组成的，其疏水性侧像图与ＬＶ株和ＶＲ－２３３２株（美洲型）几乎相同，这表明两种基因型的核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）具有一定的保守性。由于Ｎ蛋白是ＰＲＲＳＶ所有结构蛋白中免疫原性比较强的病毒蛋白，是现行血清学试验的抗原基础，因此Ｎ基因的分子克隆为研制ＰＲＲ