稳定过表达Smac基因对胃癌细胞株凋亡活性的调控作用

目的　探讨稳定过表达Smac基因对胃癌细胞凋亡的影响。方法　脂质体介导Smac基因转染MKN- 45细胞,G418筛选阳性克隆。逆转录聚合酶链反应（RT -PCR）和Western印迹鉴定Smac表达,同时以丝裂霉素作为凋亡诱导因子,采用锥虫蓝活细胞拒染法检测癌细胞体外生长活性,透射电镜、吖啶橙溴化乙啶荧光染色法、末端TdT酶标记技术（TUNEL）观察癌细胞凋亡及比率;Western印迹、比色法检测细胞内caspase- 3表达。结果　所获胃癌亚克隆细胞MKN -45 /Smac的SmacmRNA、蛋白表达水平均显著高于MKN -45（P<0 01）。10μg/ml丝裂霉素作用6 24h后,与MKN -45细胞比较,MKN 45 /Smac细胞生长活性减弱10 .0% 30 8% （P<0 .01）,部分MKN- 45 /Smac细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率增高21 .2% （P<0. 01 ）。丝裂霉素作用后,MKN -45 /Smac细胞内caspase- 3的表达和活性均较MKN- 45细胞显著增强（P<0 .01）。结论　胃癌细胞中Smac基因的过表达,能提高丝裂霉素作用后细胞中caspase 3的表达和活性,显著诱导癌细胞凋亡,为调控胃癌细胞凋亡活性提供了新的途径。