适于SDS-PAGE分析的苹果叶片蛋白质提取方法

被引：23

作者：

曾广娟 ^{[1
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李春敏 ^{[2
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张新忠 ^{[3
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陈东玫 ^{[2
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赵永波 ^{[2
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董文轩 ^{[1
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机构：

[1] 沈阳农业大学园艺学院

[2] 河北省农林科学院昌黎果树研究所

[3] 中国农业大学园艺植物研究所

来源：

华北农学报 | 2009年 / 24卷 / 02期

关键词：

苹果; SDS-PAGE; 蛋白质提取;

D O I：

暂无

中图分类号：

S661.1 [苹果];

学科分类号：

090201 ;

摘要：

为探索苹果叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl法、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法及Tris-HCl法等5种蛋白质的提取方法。制备的样品经SDS-PAGE分离采用银染显色。结果表明,改良的Tris-HCl法在加大PVPP用量和蛋白质提取缓冲液的基础上,将丙酮沉淀蛋白质的时间由30 min增加到1 h,使蛋白质的得率最高为3.243μg/μL,上样量5μL得到的蛋白质条带数量最多,条带最清晰为41条。利用这一改良方法对苹果实生树不同节位蛋白质的动态变化进行了研究,共发现6条蛋白质差异带,分子量分别为71.9,60.5,52.6,41.1,35.3,18.5 kDa,条带清楚,背景清晰。因此,改良的Tris-HCl法适用于苹果叶片的SDS-PAGE分析。

引用

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