圆二色谱研究Asp44在稳定肌红蛋白结构中的作用

被引：7

作者：

王静云 ^{[1
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刘丹 ^{[1
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唐乾 ^{[1
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包永明 ^{[1
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郑学仿 ^{[2
]}

安利佳 ^{[1
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机构：

[1] 大连理工大学环境生命学院

[2] 辽宁省高校生物有机重点实验室大连大学

来源：

光谱学与光谱分析 | 2008年 / 02期

关键词：

肌红蛋白; 定点突变; 圆二色谱; 蛋白质结构; 结构稳定性;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q51-3 [];

学科分类号：

071010 ; 081704 ;

摘要：

为了了解肌红蛋白Mb分子表面44位天冬氨酸对稳定肌红蛋白结构的影响,用PCR定点突变的技术将肌红蛋白(Mb)基因上的第44位天冬氨酸的密码子GAT突变成赖氨酸的密码子AAA,获得突变体D44K基因,将突变体基因克隆在肌红蛋白表达质粒pGYM上,转化大肠杆菌BL21,突变蛋白D44K在大肠杆菌中大量表达,收集菌体。酶法裂解细菌,依次用硫酸铵沉淀、离子交换柱层析、凝胶柱层析分离纯化得突变肌红蛋白D44K。用圆二色谱分别研究野生型肌红蛋白及其突变体(D44K)的耐热及耐酸的变性过程。实验结果表明:用碱性氨基酸Lys取代酸性氨基酸Asp44残基,增强了肌红蛋白耐热变性能力,导致蛋白质的热变性中点温度Tm由71.9℃增加到75.1℃,但对肌红蛋白耐酸变性的能力影响不大。

引用

页码：426 / 429

页数：4

共 6 条

[1] 应用圆二色光谱研究电场对脂肪酶二级结构的影响 [J].