人血管内皮细胞生长因子的cDNA克隆及其在兔成骨细胞中的表达

目的　获得人VEGF1 65cDNA并构建其真核表达载体 ,探讨应用血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因治疗骨科各种疾患的可行性。 方法　采用巢式 (poly merasechainreaction ,PCR )技术。从HL60细胞中扩增出人血管内皮生长因子 (hVEGF1 65)cDNA ,并将这一cDNA克隆至 pcDNA3 真核表达载体上 ,构建成为 pCD -hVEGF1 65重组质粒。并对cDNA片段进行了限制性酶切分析及DNA测序分析。应用脂质体介导的基因转移技术将这一表达载体导入兔成骨细胞后 ,用链酶亲合素 -生物素 -酶复合物法 (streptavidin -biotin -enzymecomplex ,SABC)进行瞬时表达的检测。结果　经酶切鉴定及基因测序证实 ,克隆的基因片段为人VEGF1 65cDNA ,重组质粒pCD -hVEGF1 65转染成骨细胞后 ,免疫组化检测有VEGF表达。结论　我们成功地克隆了人VEGF1 65基因 ,为进一步研究VEGF基因治疗骨缺血性坏死、骨缺损及骨折的修复打下了基础。