机械牵张对诱导多能干细胞向心肌细胞分化的研究

被引：4

作者：

薛媛媛 ^{[1
]}

龚惠 ^{[1
]}

闫媛 ^{[1
]}

周寅 ^{[2
]}

叶勇 ^{[3
]}

蒋国良 ^{[1
]}

苑洁 ^{[3
]}

周宁 ^{[4
]}

葛均波 ^{[3
]}

邹云增 ^{[1
,3
]}

机构：

[1] 复旦大学生物医学研究院

[2] 生物芯片上海国家工程研究中心

[3] 复旦大学附属中山医院,上海市心血管病研究所

[4] 华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科

来源：

中国分子心脏病学杂志 | 2012年 / 12卷 / 06期

关键词：

诱导多能干细胞; 机械牵张; 分化; 心肌细胞;

D O I：

10.16563/j.cnki.1671-6272.2012.06.008

中图分类号：

R541.6 [血液循环衰竭];

学科分类号：

100201 [内科学];

摘要：

目的研究机械牵张对诱导多能干细胞向心肌细胞分化效率的影响。方法诱导多能干细胞形成拟胚体后将拟胚体分为四组:对照组(未行牵张处理),牵张组1(5-6天行24小时牵张),牵张组2(5-6天行24小时牵张,7-8天再行24小时牵张),牵张组3(5-6天行24小时牵张,7-10天再行72小时牵张),通过对小鼠诱导多能干细胞施加20%形变率的机械牵张力后,于第15天,分别计数每组跳动克隆数目从而初步在上述四组中选出诱导效率最高组,此后用荧光免疫染色、Westernblot、RT-PCR和激光共聚焦法,进一步鉴定对照组和初步筛选出的牵张组最终分化效率和细胞成熟度差异。结果机械牵张刺激下,分化15天时,牵张组2的跳动克隆数上升(P<0.05),初步筛选出牵张组2可以提高分化效率;统计α-MHC免疫荧光染色面积发现牵张组2是对照组的2.1倍(P<0.05);牵张组2TroponinI的蛋白表达量为对照组的1.7倍(P<0.05);半定量PCR结果发现,心肌细胞标志基因β-MHC,MLC-2v及心肌细胞早期转录因子Nkx2.5的表达量分别提高了6.7倍、4.4倍和11.4倍(P值均<0.05);激光扫描共聚焦显微镜对分化来的单个心肌细胞进行α-actinin观察发现,牵张组2有利于心肌细胞的伸展和成熟。结论初步验证机械牵张力作为一种刺激诱导因素,20%拉伸形变率,牵张组2(贴壁的拟胚体5-6天行24小时牵张,7-8天再行24小时牵张)的处理方法可以显著促进诱导多能干细胞向心肌细胞的分化效率,为以后的深入研究和临床应用提供了实验基础。

引用

页码：350 / 355

页数：6

共 6 条

[1]

Hydrostatic Pressures Promote Initial Osteodifferentiation With ERK1/2 Not p38 MAPK Signaling Involved [J].

Liu, Jun ;

Zhao, Zhihe ;

Li, Juan ;

Zou, Ling ;

Shuler, Charles ;

Zou, Yuanwen ;

Huang, Xuejin ;

Li, Mingli ;

Wang, Jun .

JOURNAL OF CELLULAR BIOCHEMISTRY, 2009, 107 (02) :224-232

[2]

Human Mesenchymal Stem Cells Form Multicellular Structures in Response to Applied Cyclic Strain [J].

Doyle, Adele M. ;

Nerem, Robert M. ;

Ahsan, Tabassum .

ANNALS OF BIOMEDICAL ENGINEERING, 2009, 37 (04) :783-793

[3]

BIOMECHANICAL AND MOLECULAR REGULATION OF BONE REMODELING.[J].Alexander G. Robling;Alesha B. Castillo;Charles H. Turner.Annual Review of Biomedical Engineering.2006, 0

[4]

Epigenetic histone modification and cardiovascular lineage programming in mouse embryonic stem cells exposed to laminar shear stress [J].

Illi, B ;

Scopece, A ;

Nanni, S ;

Farsetti, A ;

Morgante, L ;

Biglioli, P ;

Capogrossi, MC ;

Gaetano, C .

CIRCULATION RESEARCH, 2005, 96 (05) :501-508

[5]

Cyclic stretch induces the release of growth promoting factors from cultured neonatal cardiomyocytes and cardiac fibroblasts [J].

Cindy Ruwhof ;

Annemieke E.T. van Wamel ;

Janneke M. Egas ;

Arnoud van der Laarse .

Molecular and Cellular Biochemistry, 2000, 208 :89-98

[6]

Electrical stimulation of adult rat cardiomyocytes in culture improves contractile properties and is associated with altered calcium handling.[J].E. Holt;P. K. Lunde;O. M. Sejersted;G. Christensen.Basic Research in Cardiology.1997, 5

← 1 →