嗜水气单胞菌aer毒素基因的克隆及核苷酸序列分析附视频

以自行分离的嗜水单胞菌分离株AHCS02为研究对象,分析其产生的aer毒素基因结构。根据G enB ank中aer毒素的基因序列(M 16495),设计扩增编码aer毒素成熟蛋白基因的引物,以AHCS02的基因组DNA为模板,PCR扩增出长度为1 332 bp的核苷酸片段,进行pM D 18-T载体克隆。酶切鉴定后进行序列测定和分析,结果表明扩增的片段与M 16495的同源性达92%,将测得的序列登录G enB ank数据库,所得的序列编号为AY 136943。分析推导其核苷酸编码的氨基酸序列显示:其编码443个氨基酸,为aer毒素成熟蛋白的基因,与M 16495相比,氨基酸差异主要集中在422氨基酸残基至436氨基酸残基的位置上,在这个位置上共有8个氨基酸残基发生变化,其中在435和437氨基酸残基之间有一个氨基酸密码子丢失,氨基酸的同源性达95.5%。证明aer毒素基因的5′端保守,3′端变异较大。