昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法

谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ，ＧＳＴ）是一类具有多种生理功能的同功酶．从蜡螟幼虫（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）的提取液中分离纯化谷胱甘肽Ｓ－转移酶的基本方法如下：首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨，经１００００ｇ和１０００００ｇ分级离心；取上清液通过ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白；然后采用谷胱甘肽－琼脂糖凝胶亲和层析（ＧＳＨ－ＱＴ４），四溴酚酞二磺酸盐－琼脂糖凝胶亲和层析（ＢＳＰ－ＱＴ４），铜离子－琼脂糖凝胶螯合层析（Ｃｕ２＋－ＱＴ４）及ＰＢＥ９４－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＰＢＥ９４）聚焦层析等层析技术进一步分离纯化．将上述方法获得的色谱峰以ＣＤＮＢ和ＤＣＮＢ为底物检测生物活性．具有生物活性部分的蛋白质，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量．实验结果表明，采用ＧＳＨ－ＱＴ４亲和层析法获得的活性峰，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现出两条带，分子量为２４ｋＤ，２４．５ｋＤ左右；Ｃｕ２＋－ＱＴ６螯合层析法分离的活性峰，呈现出一条带，分子量为２４ｋＤ左右；ＰＢＥ９４－聚焦层析法分离获得三个活性峰：第一色谱峰，呈现出一条带，分子量为２３ｋＤ左右