怀菊花中咖啡酰基奎宁酸类化合物通过调节ERK/MAPK信号通路改善LPS诱导的HUVEC血管内皮细胞损伤

初步研究怀菊花总提物对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的急性肺损伤小鼠模型的影响,并进一步探究从怀菊花中分离得到的3种咖啡酰基奎宁酸类化合物对血管内皮细胞损伤模型的干预作用及其机制。本文所有动物实验饲养及操作严格遵守国家动物福利伦理与保护相关规定。采用鼻腔滴注LPS的方法建立急性肺损伤小鼠模型,经菊花总提物灌胃给药6天后,检测小鼠肺湿重/干重比及小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-6 (interleukin-6, IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β);使用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)饥饿处理12 h后,以2.5μg·mL-1 LPS诱导24 h建立血管内皮细胞损伤模型,经菊花中提取到的3种咖啡酰基奎宁酸类化合物处理24 h后,采用ELISA法测定细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β、血管细胞黏附分子-1 (vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)、内皮素-1 (endothelin-1, ET-1)水平, TBA法检测丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平,羟胺法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)水平,一步法检测一氧化氮(nitric oxide, NO)水平, Western blot法检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路p-MEK1/2、MEK1/2、p-ERK1/2、ERK1/2、p-JNK、JNK、p-P38、P38蛋白表达。结果显示,怀菊花总提物可显著降低小鼠肺湿重/干重比,降低肺泡灌洗液TNF-α、IL-6、IL-1β水平;怀菊花中咖啡酰基奎宁酸类化合物可显著升高SOD、NO水平,降低TNF-α、IL-6、IL-1β、VCAM-1、ET-1、MDA水平,并显著下调p-MEK1/2、p-ERK1/2的表达。综上,怀菊花总提物对急性肺损伤小鼠具有一定的保护作用,怀菊花中咖啡酰基奎宁酸类化合物可能是通过调节ERK/MAPK信号通路,抑制炎症因子、调节氧化应激水平,以及调节细胞间黏附分子和血管舒缩因子,从而改善LPS诱导的血管内皮细胞损伤。