补阳还五汤对全脑缺血模型大鼠再灌注不同时点皮质神经细胞钙超载的影响

目的:采用膜片钳技术和离子图像分析技术,同步观察补阳还五汤预干预对全脑缺血大鼠皮质神经细胞L型Ca2+通道及细胞内Ca2+浓度的影响,探讨Ca2+信号异常参与缺血性神经细胞损伤的机制及补阳还五汤抗脑缺血的分子机制,为临床应用本方防治缺血性脑病提供理论基础,并为中药复方研究探索新的思路和方法。方法:参照改良的Pulsinelli四血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,缺血后大鼠分别在存活2,12,24,48及72 h后进行皮质神经细胞急性分离,负载荧光指示剂Fura-2/AM,用钙离子成像系统检测单个神经细胞内Ca2+浓度。单通道电流经EPC-9膜片钳放大器放大,用Pulsefit+Pulse采集至计算机。用分析软件TAC进行测量。结果:补阳还五汤预干预除再灌注12 h外,可显著降低其他各时点大脑皮质神经细胞内Ca2+浓度,对缺血再灌后两次Ca2+堆积均表现明显的抑制作用。补阳还五汤再灌注72 h,皮质神经细胞L型Ca2+通道平均开放时间显著降低,再灌注2 h,皮质神经细胞L型Ca2+通道开放概率显著降低。结论:降低缺血再灌注不同时点皮质神经细胞内Ca2+浓度及在缺血再灌注不同时点分别降低L型Ca2+通道开放概率和开放时间是补阳还五汤抗脑缺血的重要机制。补阳还五汤预干预对缺血性神经细胞损伤的预防和治疗有非常积极的意义。