骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎大鼠关节软骨Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:通过骨灵膏(GLG)及其拆方制剂对骨关节炎关节软骨组织Wnt/β-catenin信号通路作用的研究,探讨GLG及其拆方制剂对骨关节炎的作用机制。方法:选用60只雌性SD大鼠随机分为骨灵膏组、骨膏(GUG)组、灵膏(LG)组、塞来昔布组、模型组及正常组6组,每组10只,除正常组外其余各组采用冷固法(寒冷刺激结合石膏固定的方法)6周建立骨关节炎模型,造模成功后除正常组和模型组分别给予0.9%氯化钠溶液灌胃外,其余组分别给予GLG、GUG、LG及塞来昔布灌胃,给药10周后,取大鼠膝关节软骨组织,采用免疫组化检测软骨组织Wnt-2、β-catenin的含量,采用Western Blot法检测LRP-5的表达,通过RT-PCR检测软骨细胞BMP-2、MMP-13、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达。结果:GLG可以减轻OA软骨组织浅表至钙化层各层的病理损伤;GLG及其拆方制剂可以明显下调Wnt2、β-catenin的阳性表达,其中GLG与GUG、LG比较β-catenin阳性率明显下降(P<0.01)。Western Blot结果显示GLG组LRP-5蛋白表达较其他组显著降低;FQ-RT-PCR实验结果表明在骨灵膏组BMP-2 mRNA的表达较GUG组明显增加(P<0.01),而与LG组比较明显降低(P<0.01),与正常组比较无差异(P<0.05);GLG及其拆方制剂组BMP-2、MMP-13、Caspase-3、Caspase-9 mRNA的表达较模型组显著降低(P<0.01),GLG较GUG、LG及塞来昔布比较MMP-13、Caspase-3、Caspase-9 mRNA的表达明显降低(P<0.01)。结论:GLG可能通过平衡调节OA中BMP-2 mRNA的表达,下调Wnt/β-catenin信号通路依赖的LRP-5跨膜蛋白的含量,阻止Wnt/β-catenin信号通路的过度抑制和异常激活,进而下调MMP-13、Caspase-9、Caspase-3 mRNA的表达起到减轻其对软骨ECM的降解及软骨细胞的异常凋亡作用,阻止了OA关节软骨进行性退变,GLG的上述作用优于其拆方制剂GUG和LG及塞来昔布。