重组鸡β-防御素10蛋白的原核表达及其抗菌活性的测定

被引:16
作者
廖文艳 [1 ]
马得莹 [1 ]
韩宗玺 [2 ]
刘胜旺 [2 ]
机构
[1] 东北农业大学动物营养研究所
[2] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室
关键词
鸡AvBD10; 融合蛋白; 抗菌活性;
D O I
暂无
中图分类号
S852.5 [血清学];
学科分类号
090601 ;
摘要
鸡抗菌肽属β-防御素类,在鸡的先天性免疫中发挥重要作用。本研究将克隆得到的鸡β-防御素-10基因(AvBD10)亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中构建了重组表达质粒pGEX-AvBD10。将重组质粒转化至BL21,于37℃用IPTG诱导培养不同时间,SDS-PAGE电泳与灰度扫描显示该重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.3%。表达的AvBD10融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约为31ku。重组蛋白经纯化后,以对数生长中期的大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌和猪霍乱沙门氏菌为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组鸡AvBD10蛋白的抗菌活性。结果显示,重组鸡AvBD10蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性。此外,重组鸡AvBD10蛋白在-70℃~100℃及在pH4~pH10条件下仍具有抗菌活性。
引用
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