水蛭素基因的递归PCR合成和在大肠杆菌中的表达与分泌

水蛭素是凝血酶最强的特异抑制剂，可望成为预防和治疗各种血栓疾病的有效药物。根据医用水蛭（Ｈｉｒｕｄｏｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ）头部水蛭素（ＨＶ－２）的氨基酸序列，通过递归ＰＣＲ，合成水蛭素基因，并重组到本实验室改建的大肠杆菌分泌型表达载体ｐＩＮ－ｏｍｐＡ－ＨＩ中，使水蛭素基因的编码序列直接位于大肠杆菌外膜蛋白Ａ信号肽序列的下游。转化大肠杆菌ＤＨ５α，筛选出重组体，经ＰＣＲ，限制酶切图谱和序列分析，结果表明所合成的水蛭素基因与设计完全一致。水蛭素基因在大肠杆菌中得到表达，重组水蛭素（ｒＨＶ－２）被分泌到细胞周质及培养基中，表达量占菌体蛋白的１９．８％，并且有明显抗凝血酶生物活性。经分离纯化，产物在质谱分析中显示基本为单一成分，分子量为６８９３．１Ｄａ，证明重组水蛭素在分泌过程得到正确加工。