下调Foxp3基因表达对人调节性T细胞功能的影响

目的利用RNA干扰技术下调Foxp3表达,观察其对人CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）表型及功能的影响。方法利用Foxp3 siRNA转染人CD4+CD25+Freg,荧光显微镜和流式细胞仪（FACS）检测转染效率,实时定量PCR和Western印迹分别鉴定Foxp3基因及Treg功能相关基因表达、Foxp3蛋白表达,细胞增殖实验检测Treg抑制功能,FACS测Treg表型标记,ELISA检测细胞因子表达。结果 Foxp3 siRNA转染人CD4+CID25+Treg效率为68%,与对照组相比,转染后的细胞Foxp3基因下调了61.4%（P<0.01）,Foxp3蛋白表达较低,Treg功能相关基因和主要表型标记也较对照组有改变,差异有统计学意义。功能试验提示无论是在异种还是同种抗原刺激的淋巴细胞反应中,Foxp3 siRNA转染的Treg与对照组相比,对效应性T细胞的抑制作用较弱（异种抗原组83%比48%,P<0.05;同种抗原组65%比28%,P<0.01）,且主要抑制性和效应性细胞因子的表达下降,差异有统计学意义。结论 Foxp3是人天然Treg维持其抑制性功能的核心细胞内标志。