水稻矮缩病毒基因组第八号片段的cDNA克隆序列分析及在大肠杆菌中的表达

从水稻矮缩病毒（ＲＤＶ）中国福建分离物中分离出基因组第八号片段ｄｓＲＮＡ，经逆转录合成ｃＤＮＡ，应用聚合酶链式反应技术扩增了编码区ｃＤＮＡ，并克隆在ｐＧＥＭ３Ｚｆ（一）载体上。该片段编码病毒外层外壳蛋白。对重组子进行限制性内切酶分析，亚克隆及全序列测定，结果表明，克隆片段全长１３５ｂｐ含有一个１２６６ｂｐ的阅读框架，编码一个含有４２１个氨基酸的多肽。与日本流行株相应片段比较，核苷酸和氨基酸水平的同源率分别为９４．４％和９７．９％。另外，我们所克隆的片段在距起始密码子５３２一５３４处较日本株系多了３个核苷酸，导致ＲＤＶ中国福建分离物外层外壳蛋白比日本株多出一个氨基酸。将该编码区ｃＤＮＡ克隆到原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓＡ上，经ＩＰＴＧ诱导，用ＲＤＶ抗体进行蛋白Ｗｅｓｔｅｍ印迹分析表明，该基因在大肠杆菌中得到高效表达。这项工作为以后进一步开展水稻抗矮缩病基因工程，研究ＲＤＶ与传毒介体昆虫之间的识别关系奠定了基础。