巴戟天多糖含药血清对体外培养成骨细胞凋亡的保护作用观察

目的:通过体外培养成骨细胞(osteoblast,OB),观察巴戟天多糖对细胞凋亡的保护作用,探讨巴戟天促进成骨细胞活性的机制。方法:取巴戟天多糖和巴戟天水提液制备含药血清,用含药血清进行细胞培养。取24h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,取2代培养的成骨细胞,分为对照组(培养过程中仅加入大鼠血清)、诱导凋亡组(对照组中加入全反式维甲酸)、巴戟天水提物组(诱导凋亡组中加入巴戟天水提物药物血清)、巴戟天多糖组(诱导凋亡组中加入巴戟天多糖药物血清),通过荧光显微镜观察,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2/Bax基因表达,对巴戟天多糖在细胞凋亡过程中的作用进行评价。结果:诱导凋亡组12h诱导的OB出现凋亡,细胞核或细胞质内可见致密的黄绿染色,染色质形成明亮的凝聚块,24h单个凋亡细胞与周围的细胞分离,细胞皱缩呈圆形或卵圆形,细胞变小,胞浆致密,细胞器相互靠近,染色质浓缩,形成不同形状和大小的块状。巴戟天水提物组、巴戟天多糖组凋亡率显著低于诱导凋亡组(P<0.01),且巴戟天多糖组低于巴戟天水提物组(P<0.05)。凋亡细胞Bcl-2 mRNA表达水平:对照组>巴戟天多糖组>巴戟天水提物组>诱导凋亡组。Bax mRNA表达水平:诱导凋亡组>巴戟天水提物组>对照组>巴戟天多糖组(P<0.01)。Bcl-2/Bax:对照组>巴戟天多糖组>巴戟天水提物组>诱导凋亡组(P<0.01)。结论:巴戟天在一定程度上可抑制全反式维甲酸诱导的成骨细胞凋亡,且巴戟天多糖的这种作用显著优于巴戟天水提物,说明巴戟天多糖是巴戟天抑制成骨细胞凋亡的主要成分之一。