金色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌和副溶血弧菌单管多重PCR检测方法的建立及初步应用

被引：1

作者：

吴永生 ^{[1
]}

刘思国 ^{[2
]}

何浩 ^{[1
]}

王春来 ^{[2
]}

宫强 ^{[2
]}

彭永刚 ^{[2
]}

王牟平 ^{[2
]}

罗公平 ^{[3
]}

魏凤祥 ^{[2
]}

孔宪刚 ^{[2
]}

机构：

[1] 绥芬河进出口检验检疫局

[2] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

[3] 黑龙江进出口检验检疫局

来源：

中国预防兽医学报 | 2006年 / 04期

关键词：

多重PCR; 金黄色葡萄球菌; 副溶血性弧菌; 伤寒沙门氏菌;

D O I：

暂无

中图分类号：

R450 [];

学科分类号：

摘要：

本研究根据金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,SA)耐热核酸酶(nuc)基因、伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphi,ST)鞭毛抗原(H1-d)基因和副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,VP)热稳定直接溶血素(tdh)基因,分别设计了三对引物Nuc-F/Nu-R、H1-d-F/H1-d-R和Tdh-F/Tdh-R,预计PCR扩增的DNA片断分别为279bp、202bp和458bp。通过对单个基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及对单管多重PCR扩增条件如引物浓度、退火温度和dNTP浓度等的优化,建立了快速检测金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌和副溶血弧菌的单管多重PCR方法,该方法检测的敏感性分别为:47.8pgST的基因组DNA,22.7pgSA的基因组DNA和0.3745pgVP的基因组DNA。模拟试验显示最低检测限度为分别为:SA150CFU/反应体系,ST98CFU/反应体系,VP53CFU/反应体系。表明该方法具有很好的应用价值和开发前景。

引用

页码：436 / 440+445 +445

页数：6