吴茱萸碱对小鼠免疫功能的调节作用

目的:研究吴茱萸碱对小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖、凋亡及生物功能的影响。方法:处死8周龄雄性C57BL/6小鼠,取胸腺、脾组织研磨过滤为单细胞悬液,MTT法测定ConA诱导的脾和胸腺淋巴细胞增殖活性,ELISA法测定培养上清液IL-2、IL-12活性,RT-PCR法检测0.75μmol/L吴茱萸碱处理细胞的Bcl-2和CDK2基因mRNA水平,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率、死亡率和细胞内ROS水平,荧光显微镜检测Bcl-2、CDK2、Bax蛋白表达率。结果:MTT显示当浓度≥0.5μmol/L时,吴茱萸碱在24、48和72 h均明显抑制小鼠ConA诱导的胸腺、脾淋巴细胞增殖(P<0.05);ELISA结果显示吴茱萸碱处理的小鼠脾和胸腺细胞释放IL-2、IL-12的功能较对照组明显减低(P<0.05);RT-PCR显示0.75μmol/L的吴茱萸碱处理后细胞Bcl-2和CDK2的mRNA水平较对照组明显升高。与对照组相比,0.75μmol/L吴茱萸碱在6、12、24 h均可诱导小鼠胸腺细胞、脾细胞明显凋亡(P<0.05)。12 h双氢二绿荧光黄(DCF)阳性的细胞百分比明显高于对照组,但24和48 h药物组罗丹明阳性的细胞百分比与对照组无明显差异,但药物处理组细胞出现大小不一的两群细胞,直方图呈双峰,其中一群细胞DCF呈阴性。结论:吴茱萸碱可通过Bcl-2、CDK2上调,抑制小鼠体外培养的脾和胸腺淋巴细胞增殖诱导其凋亡,同时细胞分泌IL-2和IL-12的生物活性亦明显下降,细胞内ROS水平增高,但随着药物处理时间的延长,细胞死亡率升高,死亡细胞内ROS水平明显降低。