目的建立HPLC法测定六合维生素丸中维生素B1、维生素B2、维生素C和烟酰胺含量的测定方法。方法色谱柱为C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相为离子对溶液(含1.5mol·L-1戊烷磺酸钠和3.4mmol·L-1庚烷磺酸钠的2.4mL.L-1三乙胺溶液,用冰醋酸调节pH值至3.0)-甲醇(85∶15);流速1.0mL·min-1;检测波长254nm。结果维生素B1、维生素B2、维生素C和烟酰胺的线性范围分别为0.079~0.710μg(r=0.9999),0.039~0.353μg(r=0.9998),1.169~10.519μg(r=0.9998)和0.039~0.352μg(r=0.9999),平均回收率分别为99.6%(RSD为0.6%,n=9),99.4%(RSD为0.9%,n=9),99.3%(RSD为0.5%,n=9)和99.1%(RSD为0.3%,n=9)。结论该方法简便、快速,专属性强,可有效地控制六合维生素丸中维生素B1、维生素B2、维生素C和烟酰胺的含量。