应用实时荧光定量PCR检测外源基因拷贝数的新方法

被引：10

作者：

万艳

李丽玲

陈小佳

机构：

[1] 暨南大学生物工程研究所

来源：

暨南大学学报(自然科学与医学版) | 2009年 / 30卷 / 03期

关键词：

外源基因; 拷贝数; 实时定量PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

R450 [];

学科分类号：

100215 ;

摘要：

介绍一种采用实时荧光定量PCR法鉴定重组细胞株基因组中外源基因拷贝数的方法.首先根据研究对象建立标准品,以拟检测的外源基因设计特定的引物,得出标准曲线,然后在不同重组细胞株中对外源基因进行Real-Time PCR鉴定,根据结果与标准品比对得出实际的拷贝数.结果表明:以转染sPDGFRα基因的重组CHO-K1细胞为例,采用该方法,利用标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系,并且具有较大的线性范围(101-105拷贝);测得各重组细胞株外源基因拷贝数不同,3次独立实验表明结果一致.与传统杂交技术鉴定转基因拷贝数相比,该方法具有高效省时、更稳定、高通量和低成本等优点.

引用

页码：310 / 313

页数：4

共 4 条

[1] 哺乳动物细胞高效表达系统研究进展 [J].

张国强 ;

刘志刚 ;

俞炜源 .

生物技术通讯, 2005, (01) :56-59

[2] Estimating the copy number of transgenes in transformed rice by real-time quantitative PCR [J].

Litao Yang ;

Jiayu Ding ;

Chengmei Zhang ;

Junwei Jia ;

Haibo Weng ;

Wenxuan Liu ;

Dabing Zhang .

Plant Cell Reports, 2005, 23 :759-763

[3]

An efficient homologous recombination vector pTV(I) contains a hot spot for increased recombinant protein expression in Chinese hamster ovary cells[J] . Raju K Koduri,John T Miller,Pallaiah Thammana.Gene . 2001 (1)

[4]

Estimating the number of integrations in transformed plants by quantitative real-time PCR .2 Mason,G,Provero,P,Vaira,AM,Accotto,GP. BMC Biotechnol . 2002

← 1 →