地高辛标记核酸探针检测牛粘膜病病毒

本课题建立了地高辛标记核酸探针检测牛病毒性腹泻 -粘膜病病毒 ( BVDV)的诊断方法。根据 BVDV基因序列的结构特点 ,在编码非结构蛋白 p1 2 5高度保守基因区内 ,设计合成一对特异性引物。以 PCR技术从 BVDV基因重组质粒中扩增出了 BVDV特异的、保守的 40 0 bp核苷酸片段 ,经纯化后 ,地高辛标记 ,制备牛病毒性腹泻病毒的特异性核酸探针。通过检测 BVDV细胞培养物、相关病毒及核酸载体和 BVDV细胞培养物的总 RNA、反转录产物及 RT- PCR产物 ,结果证明 ,该探针特异性强、敏感性高 ,适于病毒反转录产物的检测。本试验用所制备的核酸探针对某奶牛场的腹泻犊牛粪便进行了 BVD的临床诊断的初步应用试验。