核定位信号筛选系统的构建

被引：7

作者：

王冀姝

陈萍

孙强

牛立国

周鹏

张浩

韩骅

苏成芝

机构：

[1] 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安,第四

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2000年 / 03期

关键词：

核定位信号; 出核信号; 基因克隆; 酵母;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2000.03.003

中图分类号：

Q51 [蛋白质]; Q75 [分子遗传学];

学科分类号：

071007 ;

摘要：

建立了一酵母克隆系统用于克隆含核定位信号 (NLS)的蛋白质的基因 .用表达转录因子GAL4 DNA结合域 - p53(GAL4- DBD- p53)融合蛋白的质粒转化酵母 HF7c,使 GAL4- DBD- p53可结合于报告基因的启动子但因无转录激活域而不能激活转录 .构建一酵母穿梭载体 ,可表达无NLS的 GAL4转录激活域 -大 T抗原 (GAL4- AD- LT)融合蛋白 .融合蛋白基因的下游插入一多克隆位点 .将 c DNA文库插入多克隆位点后 ,如果 c DNA片段可编码 NLS,则 GAL4- AD- LT分子可进入细胞核 ,并通过 LT与 p53的相互作用而使 GAL4- AD结合于启动子和激活报告基因的转录 .构建了这一克隆系统的各质粒 ,并用绿色荧光蛋白 (GFP)验证了其对核内蛋白和胞浆蛋白的甄别能力 .这一系统将有助于从 c DNA文库中筛选编码带有 NLS的蛋白质的基因

引用

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