担子菌漆酶的分离纯化及其性质研究

采用硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、PhenylSepharoseTM6FastFlow疏水柱层析等方法 ,得到电泳纯的漆酶同工酶Lac1 ,纯化倍数为 31 8.4,活力回收率为 1 8.6%。用SDS PAGE测得该酶分子量为 60 .3kD ,而经质谱分析为 5 5 .94kD。最适反应温度为 65℃ ,最适反应pH值为 2 .2～ 2 .8,酶的等电点pI(室温 )为 4.0 2 ,其N末端序列为AIGPVTDL ,用硫酸 酚法测得其含糖量为 49.2 %。 2 5℃条件下 ,以ABTS( 2 ,2’ azinobis ( 3 ethylbenzthiazoline 6 sulphonate)为底物的Km为 1 7.5 μmol L。该酶在 45℃ ,pH3.0～ 9.5较稳定。Cu2 + 对酶活有明显的促进作用 ,Fe2 + 完全抑制酶的活性 ,Mn2 + 和Ag+ 对酶活无明显影响。DTT(Dithiothreitol,二硫苏糖醇 )和NaN3完全抑制酶的活性。Koshland试剂对漆酶的活力影响比较大 ,色氨酸可能是酶活力的必需基团。